高分子結(jié)合物含置測定法
本法系利用高分子結(jié)合物、低分子結(jié)合物及游離多糖在
定磷含量,計(jì)算髙分子結(jié)合物的含量。
試劑 (1) 5m o l/L氣化鈉溶液精密稱定氯化鈉
2 9 .2 2 g ,加水溶解并稀釋至1 0 0m l,室溫保存。
(2 )1 .5m o l/L硫酸于1體積98%的硫酸中加人1 1體
積的水,混勻。
(3)2. 5%鉬酸銨稱取鉬酸銨2. 65g, 加水溶解并稀釋
至 100mlo
(4)10%抗壞血酸稱取抗壞血酸10g, 加水溶解并稀
釋至100ml。
(5 )礦化試劑硫酸與70%高氯酸等體積混合制得。
( 6 )產(chǎn)色試劑水、1 .5m o l/L硫酸、2 .5% 鉬酸銨、
10%抗壞血酸,按2 : 1 : 1 : 1體積比混合配制.
(7)8(Vg/ml磷對(duì)照品貯備液精密稱定經(jīng)100°C干燥的
磷酸氫二鈉0. 3665g或磷酸二氫鉀0 .3 5 0 9 g ,加水500ml、
5mol/L硫酸溶液10ml溶解,補(bǔ)加水至1000ml。臨用時(shí),將
貯備液做20倍稀釋,即為磷對(duì)照品工作液。
(8 )1 .0m o l/L氫氧化鈉溶液稱取4 g氫氧化鈉,加水
溶解并稀釋至100ml。
供試品溶液的制備(1)分步沉淀原液用生理氯化鈉
溶液稀釋至多糖含量20?2 8 ^ 7 ^ 1或成品疫苗3ml,加人
3120 人血液制品中糖及糖醇測定法
5m o l/L氯化鈉溶液0. 7 5 m l,混勻后加人無水乙酵15ml,于
一20X;冰箱放置72?96小時(shí),以每分鐘8000 ^ 4X:離心90
分鐘,吸取上清液為供試品溶液2 ; 于沉淀中加人50%乙醇
溶液0 .5 m l,加玻璃珠,混合后室溫放置1 小時(shí);再加人
50%乙醇溶液1.5ml,混合后室溫放置2 小時(shí),然后以每分
鐘8000轉(zhuǎn)8°C離心1小時(shí),吸取1. 8m l上清液為供試品溶液
3 ; 沉淀再加人l.O m o l/L氫氧化鈉溶液0.5ml, 混合后室溫
放置1小時(shí),加水1.25ml,作為供試品溶液4。
(2)取多糖含量20?28Mg /m l的原液或成品疫苗1. Oml
為供試品1。
(3 )供試品溶液的礦化分別量取1 .0m l供試品1、
1 .5m l供試品溶液2、0 .7m l供試品溶液3、0 .5m l供試品溶
液4 各2 份;分別加人礦化試劑0. 1 5 m l,置150°C干燥1小
時(shí),然后升溫至180X:干燥3 0分鐘,再升溫至250°C干燥1
小時(shí)。
測定法量取水1 .9 5 m l,加礦化試劑50^1后加2.0ml
產(chǎn)色試劑,混勻后置37T:水浴2 小時(shí),在波長8 2 5 m n處測
定吸光度,作為空白對(duì)照。
于礦化好的供試品溶液中加水1.85ml,加產(chǎn)色試劑
2.0ml,混勻后置37TC水浴2 小時(shí),在波長825nm處測定吸
光度。
分別量取磷對(duì)照品工作液0. 1ml、0. 2ml、0. 4ml、
0.8ml、1 .0m l于試管中,每管依次加水1. 85ml、1.75ml、
1.55ml、1.15ml、0. 95ml;然后每管分別加入礦化試劑
5 0 f i l后加2. Oml產(chǎn)色試劑,混勻后置37°C水浴2 小時(shí),在
波長825nm處測定吸光度。
結(jié)果計(jì)算以磷對(duì)照品溶液的濃度對(duì)其相應(yīng)的吸光度作
直線回歸,求得直線回歸方程。將供試品溶液的吸光度代人
直線回歸方程,求出磷含量。
供試品磷含量(Fg /tn l)分別為:
P ^ C A j X S ) / ! . 0
P2 = CA2 X 18. 75)/l. 5
P3 = (A3X2. 0)/0. 7
P4 = (A t X 2. 0)/0. 5 - (P s X10)/100
試驗(yàn)有效性8 0% <朽/ ( 尸2+ 朽+ 尺)<120%
供試品高分子結(jié)合物含量(%) = P 4/ ( 朽+ P 3 + P , ) X 100
供試品游離多糖含量(% ) = [1 — / (P2 + P 3 + P 4) ] X 100
式中 f V P2, P3、P4 為供試品1,供試品溶液2,
供試品溶液3 , 供試品溶液4 的磷含量;A 、A 2、A 3、A,
為供試品1 , 供試品2 , 供試品3 , 供試品4 中取樣礦化后的
磷含量。
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