3 1 1 8己二酰胼含量測定法
本法系依據(jù)在四硼酸鈉存在的條件下,己二酰肼
(A D H )中的氨基基團(tuán)能與三硝基苯磺酸(TNBS)發(fā)生顯色反
應(yīng),采用紫外-可見分光光度法測定b 型流感嗜血桿菌多糖
衍生物中己二酰肼的含量。
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中國藥典2 0 1 5年版
試劑(1 )己二酰肼對照品貯備液(lm g /m l) 精密稱定
已二酰肼0. 1 0 0 g ,加水定容至1 0 0m l,于一20°C保存。
(2 )己二酰肼對照品工作液G C ^ g /m l)精密量取ADH
對照品貯備液0. 2 m l,加水定容至10ml。
(3 ) 5% 四砸酸鈉溶液稱取四硼酸鈉(Na2B40 7 •
10H2O)47. 3 5 g ,加水定容至5 0 0m l,于室溫保存。
(4)3% TN B S溶液量取TNBS 5ml,加水定容至
5 0m l,于一20°C保存。
測定法量取5%四硼酸鈉溶液1.0ml,加水lm l,混
勻,再加人3%TNBS溶液0 .3 m l,混勻,于室溫放置1 5分
鐘,上海奧析科學(xué)儀器有限公司紫外分光光度計UV1902在波長500mn處測定吸光度,作為空白對照。
先將供試品用水稀釋至己二酰肼濃度不高于ZO^tg/ml,
作為供試品溶液,然后取1 .0 m l,加人5% 四砌酸鈉溶液
1 .0 m l,自“加人3% TNBS溶液0.3ml” 起同法操作。
分別取己二酰肼對照品工作液0.2ml、0.4ml、0.6ml、
0. 8ml、1. Oml于試管中,每管依次加水0. 8ml、0. 6ml、
0.4ml、0. 2ml. O m l,加入5%四硼酸鈉溶液1. O m l,自“加
人3% TNBS溶液0.3ml” 起同法操作。
結(jié)果計算以己二酰肼對照品工作液的濃度對其相應(yīng)的
吸光度作直線回歸,求得直線回歸方程,將供試品溶液的吸
光度代人直線回歸方程,求出供試品溶液的己二酰肼含量,
根據(jù)稀釋倍數(shù)計算供試品的己二酰肼含量。
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