上海奧析科學(xué)儀器有限公司UV1901PC紫外分光光度計(jì)細(xì)胞色素C 活力測(cè)定法細(xì)胞色素C 活力測(cè)定法
試劑(1 )磷酸鹽緩沖液(0 .2 m o l /L ) 取磷酸氫二鈉
71. 6 4 g ,加水使溶解成1000ml,作為甲液。另取磷酸二氫
鈉27. 6 0 g ,加水使溶解成1000ml,作為乙液,取甲液81ml
與乙液1 9 m l ,混勻,調(diào)節(jié)p H 值至7. 3。
( 2 )磷酸鹽緩沖液(O .lm d /L ) 取磷酸鹽緩沖液
(0. 2mol/L)500ml,加水稀釋至 1000ml,調(diào)節(jié) pH 值至 7. 3。
( 3 )磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L) 取磷酸鹽緩沖液
(0. 2mol/L) 100ml, 加水稀釋至 1000ml, 調(diào)節(jié) pH 值至 7. 3。
(4 )琥珀酸鹽溶液取琥珀酸與氫氧化鉀各4. 72g, 加
水使溶解成1 0 0m l,調(diào)節(jié)p H 值至7. 3。
(5 )qinhuajia 溶液取qinhuajia 0. 65g,加水使溶解成100ml
后,用稀硫酸調(diào)節(jié)p H 值至7. 3。
(6 )去細(xì)胞色素C 的心懸浮液取新鮮豬(牛)心2 只,除
去脂肪與結(jié)締組織,切成條,用絞肉機(jī)絞碎,置紗布兜中,
用水沖洗約2小時(shí)(經(jīng)常攪動(dòng),擠出血色素),擠干,用水洗
數(shù)次,擠干,置磷酸鹽緩沖液(0. Im o l/L )中浸泡約1 小時(shí),
擠干,重復(fù)浸泡1次,用水洗數(shù)次,擠干,置組織搗碎機(jī)內(nèi),
加磷酸鹽緩沖液(0.02md/L)適量恰使豬(牛)心浸沒(méi),搗成勻
漿,離心10分鐘(普通離心機(jī)),取上層混懸液,加冰塊少
量,迅速用稀醋酸調(diào)節(jié)p H 值至約5 . 5 ,立即離心1 5分鐘,
166 .
取沉淀,加等體積的磷酸鹽緩沖液(0. lm o l/L ) ,用玻璃勻漿
器磨勻后,貯存于冰箱中;臨用時(shí)取1.0ml, 加磷酸鹽緩沖
液(0. lmol/L )稀釋至 10ml。
供試品溶液的制備取供試品,加水制成每lm l中含細(xì)
胞色素C 約3mg的溶液。
測(cè)定法取磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L)5ml、琥珀酸鹽溶
液1.0ml與供試品溶液0 .5m l(如系還原型制劑,.應(yīng)加人
O.Olmol/L鐵qinhuajia 溶液0_ 0 5 m l) ,置25ml具塞比色管中,
加去細(xì)胞色素C 的心懸浮液0. 5m l與qinhuajia 溶液1. Oml, 加
水稀釋至1 0 m l,搖勻,以同樣的試劑作空白,照紫外-可見(jiàn)
分光光度法(通則0401),在550nm的波長(zhǎng)處附近,間隔
0.5mn找出zui大吸收波長(zhǎng),并測(cè)定吸光度,直至吸光度不再
增大為止,作為酶還原吸光度;然后各加連二亞硫酸鈉約
5m g ,搖勻,放置約10分鐘,在上述同一波長(zhǎng)處測(cè)定吸光
度,直至吸光度不再增大為止,作為化學(xué)還原吸光度;按下
式計(jì)算:
細(xì)胞色素C 活力=
化學(xué)還原吸光度
X100%
掃一掃,加微信
版權(quán)所有 © 2019 上海奧析科學(xué)儀器有限公司
備案號(hào):滬ICP備13035263號(hào)-2
技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 管理登陸 GoogleSitemap