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上海奧析科學(xué)儀器有限公司紫外分光光度計(jì)第三法測(cè)qing化物
更新時(shí)間:2016-08-24 點(diǎn)擊次數(shù):2379

第三法

原理在酸性條件下溴化氰與吡啶聯(lián)苯胺發(fā)生顯色反

應(yīng),采用紫外-可見分光光度法測(cè)定H ib多糖衍生物中溴化

氰的含量。

試劑 1 )6 0%的吡啶溶液量取吡啶30ml,加水

20ml,搖勻,即得。

(2)2%鹽酸溶液量取鹽酸0.5ml,加水9. 5ml,搖勻,

即得。

(3 )吡啶聯(lián)苯胺溶液取聯(lián)苯胺0.5g,精密稱定,加

60%吡啶溶液50ml使溶解,再加人2%鹽酸溶液10ml,搖

勻,即得。臨用前配制。

對(duì)照溶液的制備(1)0. 1 m g /m l溴化氰對(duì)照貯備液

取溴化氰10mg,精密稱定,加乙腈適量使溶解,加水稀釋

100ml,搖勻,即得。臨用前配制。

(2 )溴化氰對(duì)照工作液(500ng/ml) 精密量取溴化氰對(duì)

照貯備液lm l,加水稀釋至200ml,搖勻,即得。

供試品溶液的制備取多糖衍生物適量,配制成lOmg/ml

的溶液,即得。

測(cè)定法量取吡啶聯(lián)苯胺溶液2. Oml,加水2. Oml,混

勻,2CTC以下、暗處放置1 5分鐘后,在波長(zhǎng)520mn處測(cè)定

吸光度,作為空白對(duì)照。

量取供試品溶液2. O m l加吡啶聯(lián)苯胺溶液2. Oml,

勻,20X:以下、暗處放置1 5分鐘后,在波長(zhǎng)520nm處測(cè)定

吸光度。

分別量取溴化氰對(duì)照工作液0.1ml、0.2ml、0.4ml、

0.6ml、0.8m l1. Om l于試管中,每管依次加水1.9ml

1.8ml、1.6ml1.4ml、1.2ml、1.0ml,加人P比嗤聯(lián)苯胺溶

2. Oml,混勻,20°C以下、暗處放置1 5分鐘后,在波長(zhǎng)

520mn處測(cè)定吸光度。

結(jié)果計(jì)算以對(duì)照工作液中溴化氰的含量(ng/ml) 對(duì)其

相應(yīng)的吸光度作線性回歸,求得線性回歸方程,將供試品溶

液的吸光度代人線性回歸方程,求得供試品溶液中溴化氰的

含量 B (n g/m l) 。

供試品中溴化氰的含量(ng/mg) = |

100

 

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