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0 4 0 1紫外-可見(jiàn)分光光度法

紫外-可見(jiàn)分光光度法是在190?800mn波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定

物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測(cè)定的方法。當(dāng)

光穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，物質(zhì)對(duì)光的吸收程度隨光的波長(zhǎng)不

同而變化。因此，通過(guò)測(cè)定物質(zhì)在不同波長(zhǎng)處的吸光度，并

繪制其吸光度與波長(zhǎng)的關(guān)系圖即得被測(cè)物質(zhì)的吸收光譜。從

吸收光譜中，可以確定zui大吸收波長(zhǎng)和zui小吸收波，長(zhǎng)

Xn,n o物質(zhì)的吸收光譜具有與其結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征性。因此/可

以通過(guò)特定波長(zhǎng)范圍內(nèi)樣品的光譜與對(duì)照光譜或?qū)φ掌饭庾V

的比較，或通過(guò)確定zui大吸收波長(zhǎng)，或通過(guò)測(cè)量?jī)蓚€(gè)特定波

長(zhǎng)處的吸收比值而鑒別物質(zhì)。用于定量時(shí)，在zui大吸收波長(zhǎng)

處測(cè)量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對(duì)照溶

液的吸光度進(jìn)行比較或采用吸收系數(shù)法求算出樣品溶液的濃度。

儀器的校正和檢定

1 .波長(zhǎng)由于$ 境因素對(duì)機(jī)械部分的影響，儀器的波長(zhǎng)

經(jīng)常會(huì)略有變動(dòng)，因此除應(yīng)定期對(duì)所用的儀器進(jìn)行全面校正

0 7 2 1維生素A 測(cè)定法

本法是用紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401)或液相

色譜法(通則0512)測(cè)定維生素A 及其制劑中維生素A 的含

量，以單位表示，每單位相當(dāng)于全反式維生素A 醋酸酯

0. 344F g 或全反式維生素A 醇0. 300jug。

測(cè)定應(yīng)在半暗室中盡快進(jìn)行。

*法（紫外-可見(jiàn)分光光度法）

由于維生素A 制劑中含有稀釋用油和維生素A 原料藥

中混有其他雜質(zhì)，采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)得的吸光度

不是維生素A *的吸收。在以下規(guī)定的條件下，非維生

素A 物質(zhì)的無(wú)關(guān)吸收所引人的誤差可以用校正公式校正，

以便得到正確結(jié)果。

校正公式采用三點(diǎn)法，除其中一點(diǎn)是在吸收峰波長(zhǎng)處測(cè)

得外，其他兩點(diǎn)分別在吸收峰兩側(cè)的波長(zhǎng)處測(cè)定，因此儀器

波長(zhǎng)應(yīng)準(zhǔn)確，在測(cè)定前，應(yīng)對(duì)儀器波長(zhǎng)進(jìn)行校正。

測(cè)定法取供試品適量，精密稱(chēng)定，加環(huán)己烷溶解并定

量稀釋制成每lm l中含9?1 5單位的溶液，照紫外-可見(jiàn)分

光光度法（通則0 4 0 1 ) ,測(cè)定其吸收峰的波長(zhǎng)，并在下表所

列各波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算各吸光度與波長(zhǎng)3 2 8 n m處吸

光度的比值和波長(zhǎng)3 2 8 n m處的E & 值。

波長(zhǎng)/nm 吸光度比值波長(zhǎng)/nm 吸光度比值

300 0. 555 340 0. 811

316 0. 907 360 0. 299

328 1.000

如果吸收峰波長(zhǎng)在326~329mn之間，且所測(cè)得各波長(zhǎng)

吸光度比值不超過(guò)表中規(guī)定的士0. 02, 可用下式計(jì)算含量：

每l g 供試品中含有的維生素A 的單位= E£(328mn)X1900

如果吸收波長(zhǎng)在326?329mn之間，但所測(cè)得的各波

長(zhǎng)吸光度比值超過(guò)表中規(guī)定值的± 0. 02, 應(yīng)按下式求出校正

后的吸光度，然后再計(jì)算含量：

^328 (校正）= 3. 52(2^328 ' — A 316 — A 340 )

如果在328nm處的校正吸光度與未校正吸光度相差不

超過(guò)± 3 . 0 % ,則不用校正，仍以未經(jīng)校正的吸光度計(jì)算

含量。

如果校正吸光度與未校正吸光度相差在一 15%至一 3%

之間，則以校正吸光度計(jì)算含量。

如果校正吸光度超出未校正吸光度的一 15%至_ 3%的

范圍，或者吸收峰波長(zhǎng)不在326?329nm之間，則供試品須

按下述方法測(cè)定。

另精密稱(chēng)取供試品適量（約相當(dāng)于維生素A 總量500單

位以上，重量不多于2 g ) ,置皂化瓶中，加乙醇3 0m l與

50%氫氧化鉀溶液3 m l,置水浴中煮沸回流3 0分鐘，冷卻

后，自冷凝管頂端加水lO ra l沖洗冷凝管內(nèi)部管壁，將皂化

液移至分液漏斗中（分液漏斗活塞涂以甘油淀粉潤(rùn)滑劑），皂

化瓶用水60?100ml分?jǐn)?shù)次洗滌，洗液并入分液漏斗中，用

不含過(guò)氧化物的振搖提取4 次，毎次振搖約5 分鐘，第

一次60ml，以后各次4 0 m l,合并液，用水洗滌數(shù)次，

每次約1 0 0m l,洗滌應(yīng)緩緩旋動(dòng)，避免乳化，直至水層遇酚

酞指示液不再顯紅色，液用鋪有脫脂棉與無(wú)水硫酸鈉的

濾器濾過(guò)，濾器用洗滌，洗液與液合并，置250ml

量瓶中，用稀釋至刻度，搖勻；精密量取適量，置蒸發(fā)

皿內(nèi)，微溫?fù)]去，迅速加異丙醇溶解并定量稀釋制成每

lm l中含維生素A 9?15單位，照紫外-可見(jiàn)分光光度法(通則

0401) , 在 300nm、310nm、325nm 與 334nm 四個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)定

吸光度，并測(cè)定吸收峰的波長(zhǎng)。吸收峰的波長(zhǎng)應(yīng)在323?

327nm之間，且300mn波長(zhǎng)處的吸光度與325nm波長(zhǎng)處的吸

光度的比值應(yīng)不超過(guò)0 .7 3 ,按下式計(jì)算校正吸光度：

A 325 (校正）= 6. 81325 — 2_ 553io — 4. 260A334

每l g 供試品中含有的維生素A 的單位= £；丨11(3251^1,

校正）X 1830

如果校正吸光度在未校正吸光度的97%~ 103%之間，

則仍以未經(jīng)校正的吸光度計(jì)算含量。

如果吸收峰的波長(zhǎng)不在323?327nm之間，或300nm波

長(zhǎng)處的吸光度與325nm波長(zhǎng)處的吸光度的比值超過(guò)0.73,

則應(yīng)自上述皂化后的提取液250ml中，另精密量取適量

(相當(dāng)于維生素A 300?400單位），微溫?fù)]去至約剩

5 m l,再在氮?dú)饬飨麓蹈?，立即精密加人甲?/span>3 m l ,溶解后，

采用維生素D 測(cè)定法（通則0722)第二法項(xiàng)下的凈化用色譜

系統(tǒng)，精密量取溶解后溶液5 0 ( ^ 1 ,注入液相色譜儀，分離

并準(zhǔn)確收集含有維生素A 的流出液，在氮?dú)饬飨麓蹈桑?/span>

后照上述方法自“迅速加異丙醇溶解” 起，依法操作并計(jì)算

含量。