〔含量測定〕酸性羧甲基纖維素酶活力對(duì)照品溶液的
制備取無水葡萄糖對(duì)照品適量,精密稱定,加水制成每lml
含3mg的溶液,即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液L 0ml、2。0ml、
4. 0ml、6. 0ml、8。0ml,分別置10ml量瓶中,各加水至刻度,搖__
勻。分別精密量取上述溶液各0= 5mU置25ml具塞刻度試管
中,精密加入枸櫞酸鹽緩沖液(pH t 8)1。5mU混勻,立即精密
加人3,5-二硝基水楊酸試液1。5ml,搖勻5置沸水浴中保溫15
分鐘,取出,置冰水浴中冷卻10分鐘,再加水至刻度,搖勻,靜
置90分鐘,以相應(yīng)的試劑為空白,照紫外-可見分光光度法
(通則0401),在540nm波長處測定吸光度,以吸光度為縱坐
標(biāo),葡萄糖量(mg)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測定法取本品約LOg,精密稱定9置具塞錐形瓶中,精
密加水100ml,密塞,旋轉(zhuǎn)振搖(轉(zhuǎn)速每分鐘200轉(zhuǎn))6 0分
鐘,濾過,作為供試品溶液(本液應(yīng)臨用新制)。精密量取
1%羧甲基纖維素鈉溶液1。5ml,置25ml具塞刻度試管中,
精密加人供試品溶液0. 5mU混勻5置50°C水浴中保溫30分
鐘,取出n照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法,自“立即精密加人3,
5-二硝基水楊酸溶液L 5011”起5依法測定吸光度5從標(biāo)準(zhǔn)曲
線上讀出供試品溶液中含還原糖的重量(mg)。空白管加
入1%羧甲基纖維素鈉溶液1。5ml,置50°C水浴中保溫30
分鐘,取出,立即精密加人3,5-二硝基水楊酸試液L 5ml9
搖勻,精密加人供試品溶液0。5ml,混勻,照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
項(xiàng)下的方法,自“置沸水浴中保溫1 5分鐘”起,依法進(jìn)行。
按下式計(jì)算:
X = A X l /0 . 5X100/W八 1一水分)X2
式中X— 酸性羧甲基纖維素酶活力,U /gl
A— 吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的還原糖量,mg;
W— 取樣量
2— 時(shí)間換算系數(shù)。
l g 固體酶在50°C±l°C、pH4. 8 條件下,1 小時(shí)水解1%
羧甲基纖維素鈉底物,產(chǎn)生出相當(dāng)于lm g葡萄糖的還原糖量
為一個(gè)酸性羧甲基纖維素酶活力單位,以U /g表示。
本品按干燥品計(jì)算,每l g 含酸性羧甲基纖維素酶活力不
得低于150U。
注:[1]3,5-二硝基水楊酸試液:取苯酚6。9g,加10% 氫
氧化鈉溶液15ml使溶解,用水稀釋至70ml,搖勻,再加亞硫
酸氫鈉6. 9g,振搖使溶解(甲液取酒石酸鉀鈉255g,加
10%氫氧化鈉溶液300ml使溶解,再加1%的3,5-二硝基水
楊酸溶液880ml9搖勻(乙液);將甲液與乙液混合5搖勻,得黃
色的溶液,貯于棕色瓶中,4°C放置7 天,備用。
[2]構(gòu)櫞酸鹽緩沖液(pH 4. 8) :分別精密量取0. 5mol/L
枸櫞酸溶液60ml、0. 5mol/L枸櫞酸三鈉溶液100ml,混勻,精
密量取上述溶液100ml,加水800ml,以3mol/L鹽酸溶液或
3mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)p H 值至4。8,移至1000ml量瓶
中,加水至刻度,搖勻,即得。
[3]1%羧甲基纖維素鈉溶液;精密稱取l .O g羧甲基纖維
素鈉,置具塞錐形瓶中,精密加入枸櫞酸鹽緩沖液(PH4. 8)
80ml,稱定重量,85°C±5°C邊加熱邊磁力攪拌至*溶解,
放冷,再稱定重量,用枸櫞酸鹽緩沖液(PH4. 8)補(bǔ)足減失的重
量,搖勻,以3mol/L鹽酸溶液或3mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)
p H值至4. 8,移至100ml量瓶中,加枸櫞酸鹽緩沖液
(pH4.8)至刻度9搖勻,即得。
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