闺蜜男友猛撞H花液H深-脔到她哭蛇双根宫交H-丁香婷婷综合激情五月色-来一水AV@lysav

當(dāng)前位置:主頁 > 新聞中心 > 紫外可見分光光度計法測定核酸核苷酸的原理
紫外可見分光光度計法測定核酸核苷酸的原理
更新時間:2016-05-30 點(diǎn)擊次數(shù):3341

紫外可見分光光度計法測定核酸核苷酸的原理


核酸、核苷酸及其衍生物的分子結(jié)構(gòu)中的嘌呤、嘧啶堿基具有共軛雙健 系統(tǒng)(-C=C 一C=C 一),能夠強(qiáng)烈吸收250~280nm 波長的紫外光。核 酸(DNA,RNA)的zui大紫外吸收值在260nm 處。遵照Lambert-Beer 定律, 可以從紫外光吸收值的變化來測定核酸物質(zhì)的含量。在不同pH 溶液中嘌呤、 嘧啶堿基互變異構(gòu)的情況不同,紫外吸收光也隨之表現(xiàn)出明顯的差異,它們 的摩爾消光系數(shù)也隨之不同。所以,在測定核酸物質(zhì)時均應(yīng)在固定的pH 溶 液中進(jìn)行。
核酸的摩爾消光系數(shù)(或吸收系數(shù)),通常以ε(ρ)來表示,即每升含 有一摩爾核酸磷的溶液在260nm 波長處的消光值(即光密度,或稱為光吸 收)。核酸的摩爾消光系數(shù)不是一個常數(shù),而是依賴于材料的前處理、溶液 的pH 和離子強(qiáng)度發(fā)生變化。它們的經(jīng)典數(shù)值(pH = 7.0)如下:
DNA 的ε(ρ)= 6 000 - 8 000
RNA 的ε(ρ)= 7 000 -10 000
含1μg /mL RNA 溶液的光密度為0.022~0.024。采用紫外分光光度法測 定核酸含量時,通常規(guī)定:在260nm 波長下,濃度為1μg/mL 的DNA 溶液 其光密度為0.020,而濃度為1μg/mL 的RNA 溶液其光密度為0.024。因此, 測定未知濃度的DNA(RNA)溶液的光密度OD260nm,即可計算測出其中 核酸的含量。
該法簡單、快速、靈敏度高,如核酸3μg/mL 的含量即可測出。對于 含有微量蛋白質(zhì)和核苷酸等吸收紫外光物質(zhì)的核酸樣品,測定誤差較小,若 樣品內(nèi)混雜有大量的上述吸收紫外光物質(zhì),測定誤差較大,應(yīng)設(shè)法事先除去。
三、器材
1、分析天平;2、離心機(jī); 3、容量瓶;4、紫外分光光度計;5、吸管
6、冰浴或冰箱
四、試劑
1、5%~6%氨水
2、鉬酸銨-高氯酸試劑(沉淀劑)。如配制200mL 可在193mL 蒸餾水中加
入7mL70%高氯酸和0.5g 鉬酸銨。
五、操作
1、用分析天平準(zhǔn)確稱取待測的核酸樣品500 mg,加少量蒸餾水調(diào)成 糊狀,再加入少量的水稀釋。然后用5%~6%氨水調(diào)至pH7,定容到50mL。
2、取2 支離心管,向*支管內(nèi)加入2mL 樣品溶液和2mL 蒸餾水; 向第二支管內(nèi)加入2mL 樣品溶液和2mL 沉淀劑,以除去大分子核酸作為對照。 混勻。在冰浴或冰箱中放置30 分鐘后離心(3000r/min,10 分鐘)。從* 管和第二管中分別吸取0.5mL 上清液,用蒸餾水定容到50mL。用光程為1cm 的石英比色杯,于260nm 波長處測其光吸收值(A1 和A2)。
六、計算
如果已知待測的核酸樣品不含酸溶性核苷酸或可透析的低聚多核苷酸, 即可將樣品配制成一定濃度的溶液(20~50kg/mL)在紫外分光光度計上直接 測定。

掃一掃,加微信

版權(quán)所有 © 2019 上海奧析科學(xué)儀器有限公司
備案號:滬ICP備13035263號-2 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 管理登陸 GoogleSitemap

色噜噜狠狠一区二区三区果冻| 亚洲日韩AV无码| 高清VPSWINDOWS另类乱| 免费无遮挡无码永久在线观看视频| 中文字幕人妻色偷偷久久| 亚洲AV乱码一区二区三区 | 亚洲av高清一区二区三区| 成人AAA片一区国产精品| 人妻熟妇乱又伦精品视频| 国产精品久久久久久麻豆一区| 特黄A级毛片| 香港三级日本三级妇三级| 精品久久久久久亚洲综合网| 国产美女精品一区二区三区| CHINESE中年熟妇FREE| 人物动物交互狗AA| 少妇久久久久久久久久| 国产精品无码一区二区三区| 曰批国产精品视频免费观看| 亚洲精品无码MV在线观看| 欧美熟妇另类久久久久久多毛| 无码国产伦一区二区三区视频 | 亚洲AV无码AV制服丝袜在线| 日韩人妻精品一区二区三区视频| 亚洲精品国产精品国自产观看| 国产肉体XXXX裸体137大胆| 无码人妻一区二区三区在线视频| 国产精品人人爽人人做我的可爱 | 国产成人无码一二三区视频| 久久久久无码国产精品不卡| 美女露出奶头扒开尿口| 免费人成在线观看网站| 天堂…中文在线最新版在线| 国产成人精品亚洲日本在线观看| 国产精品毛片一区二区| 女人被躁到高潮免费视频| 成人毛片18女人毛片免费看| 成人乱码一区二区三区AV| 亚洲AV人无码激艳猛片服务器| 亚洲精品WWW久久久久久| 女人和拘做受全过程免费 |