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紫外分光光度法測定葎草中總黃酮含量
更新時間:2019-03-20 點擊次數(shù):4688

 探討葎草中總黃酮含量的測定方法。方法: 以蘆丁為對照品,采用超聲提取法提取總黃酮,用亞硝酸鈉-氯化鋁-氫氧化鈉顯色法,顯色條件: 亞硝酸鈉質(zhì)量濃度 5%、氯化鋁質(zhì)量濃度 10%、氫氧化鈉質(zhì)量濃度 4%。通過紫外可見分光光度計測定律草中總黃酮的含量。結(jié)果: 檢測波長為 510 nm,蘆丁在濃度 0. 024 1 ~0. 064 0 g·L-1 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,回歸方程: y =0. 081 7x -0. 001 8( R 2 =0. 999 5) ,1 h 內(nèi)基本穩(wěn)定( RSD =0. 364%) ,重復(fù)性較好( RSD =0. 600 %) ,加樣回收率為 99. 46%( RSD =1. 685%) 。葎草[Humulus scandends(lour. )Merr.]又名拉拉秧、拉拉藤等,為桑科植物的全草 [1] ,分布在我國東北、華北、中南、西南等地區(qū)。另外在亞洲、北美、非洲等地區(qū)也均有分布 [2] 。在研究葎草提取物的抗菌作用時發(fā)現(xiàn) [3] ,其水提取液對革蘭陽性菌具有較強(qiáng)的抗菌活性,并證實抗菌作用與葎草中所含的黃酮類成分有關(guān)。本研究通過采用超聲提取法提取葎草中的總黃酮,以蘆丁為對照品,以亞硝酸鈉-氯化鋁-氫氧化鈉為顯色劑,建立紫外可見分光光度法測定葎草中總黃酮含量的方法,從而為合理利用葎草提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料
752N-紫外可見分光光度計;SK8200HPULTRASONICINSTRUMENT(上??茖?dǎo)超聲儀器有限公司);AX200 萬分之一電子天平(SHMADZU COR-PORATION JAPAN)。蘆丁準(zhǔn)品(由中國生物制品檢定所鑒定);葎草(10 月采摘于牡丹江市北山);亞硝酸鈉、三氯化鋁、氫氧化鈉和乙
醇等(所用試劑均為分析純)。
2 方法與結(jié)果
2. 1 蘆丁對照品溶液的制備
精密稱取經(jīng)干燥至恒質(zhì)量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 20 mg,置于 100mL 容量瓶中,加80%乙醇至刻度,搖勻,即得對照品溶液。
2. 2 葎草供試品溶液的制備
取葎草樣品放入研缽中粉碎過篩(40 目),精密稱取約 1g 并置于索氏提取器中,加石油醚 100 mL,回流加熱,至提取液無色,棄去石油醚提取液。待藥渣揮散干后,干燥至恒質(zhì)量,轉(zhuǎn)移到平底燒瓶中,加 80%乙醇50 mL 密塞稱質(zhì)量,超聲提取 0. 5 h,加活性炭脫色,過濾,取濾液。連續(xù)提取 5 次,合并各分濾液。
2. 3 測定波長的選擇取蘆丁對照品溶液 5 mL 置于 25 mL 容量瓶中并加入5%亞硝酸鈉溶液 1mL 搖勻,放置 6 min,加 10% 氯化鋁溶液1 mL 搖勻,放置 6 min,再加 4%氫氧化鈉溶液 8 mL 搖勻,然后用 80%乙醇定容至刻度線,搖勻,放置 10 min。同時配制未加對照品只加入顯色劑的溶液作為空白對照溶液。在 440nm ~560 nm 波長范圍內(nèi)掃描吸收曲線 [4] 。結(jié)果表明在 510nm 處有大吸光度。
2. 4 顯色劑條件的選擇
2. 4. 1 亞硝酸鈉濃度的選擇 精密量取 5 份 2. 1 項下蘆丁對照品溶液 4 mL 置于 25 mL 容量瓶中,分別加入 1%、3%、5%、7%、9%濃度的亞硝酸鈉溶液 1 mL,搖勻,放置6 min,再加入 10%氯化鋁溶液 1 mL,搖勻,靜置 6 min,再加入 4% 氫氧化鈉溶液 8 mL,然后用 80% 乙醇定容至刻度線,搖勻,放置 10 min。亞硝酸鈉濃度在 5%,有大吸收。在 510 nm 處測得吸光度值,見表 1。
2. 4. 2 氯化鋁濃度的選擇 精密量取 5 份 2. 1 項下蘆丁對照品溶液4 mL 置于25 mL 容量瓶中,分別5%亞硝酸鈉溶液1 mL,搖勻,放置 6 min,再分別加入 8%、9%、10%、11%、12%的氯化鋁溶液 1 mL,搖勻,放置 6 min,再加入 4% 氫氧化鈉溶液 8 mL,然后用 80% 乙醇定容至刻度線,搖勻,放置10 min。氯化鋁濃度在 10%,有大吸收。在 510 nm 處測定吸光度值,見表 1。

2. 4. 3 氫氧化鈉濃度的選擇 精密量取 5 份 2. 1 項下蘆丁對照品溶液4 mL 置于25 mL 容量瓶中,分別5%亞硝酸鈉溶液 1 mL,搖勻,放置 6 min,加入 10% 氯化鋁溶液 1 m,搖勻,放置 6 min,分別加入 2%、3%、4%、5%、6%的氫氧化鈉溶液8 mL,然后用80%乙醇定容至刻度線,搖勻,放置10 min。氫氧化鈉濃度在 4%,有大吸收;在 510 nm 處測定吸光度值,見表 1。
2. 5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取蘆丁對照品溶液 0. 0 mL,3. 0 mL,4. 0 mL,5. 0mL,6. 0 mL,7. 0 mL,8. 0 mL 分別置于 25 mL 容量瓶,按 2. 3項下方法操作。在 510 nm 波長處測定吸光度,以吸光度 A為縱坐標(biāo),濃度 C 為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,得回歸方程:Y =0. 081 7 X -0. 001 8,相關(guān)系數(shù):R 2 =0. 999 5。線性范圍0. 024 ~0. 064 g·L-1 ,見圖 1。蘆丁對照品在 510 nm 波長處吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線

2. 6 穩(wěn)定性實驗

按 2. 3 項下方法配制 6 份蘆丁對照品溶液,顯色后,放

置 10 min、20 min、30 min、40 min,、50min、60 min 在 510 nm波長處分別測定吸光度值,見表 2。

2. 8 加樣回收率實驗
精密稱取約 20 mg 研細(xì)過篩的葎草樣品 5 份,按 2. 2 項下方法配制,分別置于 25 mL 容量瓶中,分別加入 0. 5 mL、1. 0 mL、1. 5 mL、2. 0 mL、2. 5 mL 的對照品溶液,按 2. 3 項下
方法。在 510 nm 波長處測定吸光度值,見表 4。
2. 9 樣品含量的測定
取葎草 3 份,按 2. 2 項下方法配制,按 2. 3 項下方法操作,在 510 nm 波長處測定吸光度值。

2. 10 提凈實驗
分別取 2. 8 中 3 份提取黃酮后的葎草殘渣,再按 2. 2 項下方法提取 1 次,按 2. 3 項下方法操作。測吸光度值平均值為 0. 000 01,表明用 50 mL 80%乙醇超聲提取 5 次葎草中的總黃酮已基本提凈。

草、益母草、炮附子、黨參與生地黃,在月經(jīng)期后使用烏雞白鳳丸,該療法的有效率約 75% [11] ;③將治療劃分為行經(jīng)期與經(jīng)間期。在經(jīng)間期進(jìn)行益氣養(yǎng)陰,選取知母、墨旱蓮、白術(shù)、黨參、黃芪、生地黃、女貞子、白芍 8 味藥材,在行經(jīng)期另外添加 5 味藥材:烏賊骨、生蒲黃、椿白皮、茜草與地榆炭;④人為地把治療周期分為卵泡期、排卵期、黃體期與月經(jīng)期。特別需要注意的是,在后一個時段,即月經(jīng)期,需注意藥材選擇,進(jìn)行區(qū)別用藥。


3 中西醫(yī)結(jié)合治療
中西醫(yī)結(jié)合是當(dāng)今醫(yī)療界的潮流與發(fā)展趨勢,中醫(yī)固本,西醫(yī)檢查手段先進(jìn),兩者的結(jié)合能夠進(jìn)一步提高治療效果。目前,在中西結(jié)合治療崩漏方面,有不同觀點。王錦華等[11] 選取甘草、黨參、海螵蛸、三七、茜草、地榆炭、艾葉、當(dāng)歸、黃芪、白芍、補(bǔ)骨脂這些中藥材,在西醫(yī)方面借助雌孕激素序貫療法、抗貧血治療、診斷性刮宮、宮縮劑、止血劑,對崩漏患者進(jìn)行治療,有效率約 97. 0%;肖靜等
 取八珍湯加味
與安宮黃體、乙烯雌酚這兩類西藥,綜合治療崩漏。經(jīng)期第 5 天使用中藥方,在 5 ~22 d 使用安宮黃體 10 mg,每日1 次,22 ~27 d 使用乙烯雌酚,每日 1 次。
綜上所述,中藥治療功能性子宮出血的臨床,主要包括中醫(yī)辨證施治,中藥周期療法,中西結(jié)合治療等。
 

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